易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒的纯化

目的:探索针对易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒(VLP)的有效纯化方案.方法:培养的大肠杆菌经IPTG诱导重组HBcAg蛋白的表达,菌体超声破碎后的离心沉淀用含有不同浓度尿素的PBS缓冲液重悬溶解,经密度梯度离心并结合电镜观察对VLPs行为进行分析鉴定.以Sepharose 4FF凝胶过滤层析在选定的尿素条件下纯化沉淀溶解液,纯化获得的目的蛋白进一步在含30％山梨醇的PBS中脱盐去除尿素.整个过程以SDS-PAGE及电镜进行各步骤样品中目的蛋白的分析.结果:含有1mol/L尿素的PBS缓冲溶液重悬超声沉淀,可有效溶解聚集的VLPS,在蔗糖密度梯度离心中显示典型HBcAgVLPs的行为,且电镜观察颗粒形态结构完整.经1moL/L尿素下凝胶过滤,VLPs进一步获得纯化.在脱尿素过程中流动相采用含30％山梨醇的PBS,有效避免了VLPs在尿素去除后重新聚集.结论:尿素与山梨醇的联合应用,为具有聚集现象的VLPs纯化制备提供了一种有效解决方案.