低氧诱导人视网膜微血管内皮细胞核中乙酰肝素酶对血管内皮生长因子基因转录调控研究

目的 通过观察低氧诱导人视网膜血管内皮细胞(HRECs)胞核中乙酰肝素酶(HPA)和RNA聚合酶Ⅱ (Pol Ⅱ)的表达分布、两者相互结合及其与血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的作用,探讨在低氧诱导视网膜新生血管形成中HPA对VEGF基因转录调控的作用.方法 用低氧模型模拟剂Cocl2建立低氧模型(含Cocl2100 μmol/L的培养液培养48 h).免疫荧光染色法观察HPA与Pol Ⅱ的表达;免疫沉淀法半定量分析HPA及Pol Ⅱ的相互结合作用;染色质免疫沉淀(ChIP)联合实时定量PCR分析两组细胞中HPA与VEGF基因启动子之间的相互作用.结果 (1)免疫荧光染色结果显示低氧诱导组HRECs胞核内HPA荧光和Pol Ⅱ荧光均较正常对照组增强,且低氧诱导组胞核内HPA分布与PolⅡ相吻合.(2)免疫沉淀结果表明在低氧诱导HRECs中HPA及Pol Ⅱ相互结合共同作用,而对照组中HPA及Pol Ⅱ则无结合.(3) ChIP联合实时定量PCR实验结果显示HPA及Pol Ⅱ与VEGF启动子结合的高发生区段主要位于VEGF启动子序列-1165与-984之间,低氧诱导HRECs细胞核内HPA及Pol Ⅱ结合VEGF基因启动子水平均较正常组升高(t=-13.591,P=0.001;t=-3.188,P =0.049).结论 在低氧诱导的HRECs中,核内HPA与VEGF基因启动子直接结合,并参与了VEGF基因转录活性的调控.