Hcdc14A在体外糖尿病环境下人脑血管内皮细胞损伤中的作用

目的 观察体外糖尿病环境如高糖、高游离脂肪酸(FFA)和低氧刺激对人脑血管内皮细胞(HBVEC)人类细胞分裂周期蛋白14A(Hcdc14A)和相关周期蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响,进而探讨糖尿病诱发脑血管内皮细胞损伤的新机制.方法 分别采用不同条件的高糖、FFA和低氧刺激HBVEC,RT-PCR检测Hcdc14A的mRNA表达,Western印迹法检测Hcdc14A及相关周期蛋白周期素B、周期素D、周期素E和p53的蛋白表达,XXT法检测细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 不同浓度葡萄糖(10、15和25 mmol/L)和FFA(50、100及200 μmol/L)分别孵育HBVEC 72 h,或以25 mmol/L葡萄糖、200μmol/L FFA分别刺激24、48和72 h,均呈剂量和时间依赖性地降低Hcdcl4A的mRNA和蛋白表达(均P＜0.05),同时下调周期素B、周期素D和周期素E的蛋白表达(均P＜0.05),上调p53蛋白表达(均p＜0.05),低氧刺激也显示相似结果.联合刺激(葡萄糖25 mmdl/L+FA 200 μmol/L)48 h后,再进行低氧刺激24 h后,与正常对照组、高糖组、高FFA组及低氧组相比,高糖+高FFA+低氧联合刺激组显著下调HBVEC的Hcdc14A mRNA和蛋白表达(均P＜0.05),同时下凋周期素B、周期素D和周期素E的蛋白水平(均P＜0.05),并上调p53蛋白水平(均P＜0.05).与正常对照组、高糖组、高FFA组及低氧组相比,高糖+高FFA+低氧联合刺激组抑制HBVEC增殖的作用最为明显(40.7％±12.1％对100.0％±10.2％、67.5％±12.1％ 、55.3％±11.2％和64.4％ ±11.3％,均P＜0.05),并使细胞凋亡率明显增加(22.5％±1.77％对5.7％±0.83％、9.3％±0.95％、16.3％±1.69％和16.3％ +1.15％,均P＜0.05).结论 细胞周期调控蛋白Hcdc14A可能在糖尿病诱发脑血管内皮细胞损伤中起重要作用,可能是参与细胞损伤的主要信号通路.