微小RNA-133b靶向基质金属蛋白酶-9抑制结直肠癌细胞增殖

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-133b靶向基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测结直肠癌组织中MMP-9的表达水平;利用RNA干扰及重组质粒过表达技术在结直肠癌细胞株HCT116中调节MMP-9的表达水平,并用噻唑蓝(MTT)比色法及克隆形成实验检测细胞的增殖能力;借助生物信息学预测MMP-9的上游miRNA,并用FQ-PCR及双荧光素酶实验进行验证;通过转染技术在HCT116细胞中过表达miR-133b和MMP-9,并用MTT及克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果 MMP-9在癌组织中表达高于癌旁组织(3.17 ±0.79比1.00±0.25,P ＜0.01);MMP-9干扰组细胞增殖活力低于对照组(MTT:1.54±0.06比1.89±0.03,P＜0.01;克隆形成:6.33±1.53比13.33±0.58,P＜0.01);MMP-9过表达组细胞增殖活力高于对照组(MTT:2.10±0.12比1.82 ±0.04,P＜0.05;克隆形成:23.33-2.08比13.67±1.53,P＜0.01).miR-133b过表达组MMP-9表达低于对照组(0.42±0.06比1.00 ±0.12,P＜0.01);野生型MMP-9 3'端非编码区(3'UTR)质粒miR-133b过表达组荧光素酶活力低于对照组(0.49±0.08比0.97 ±0.08,P＜0.01),突变型MMP-9 3'UTR质粒miR-133b过表达组与对照组比较荧光素酶活力差异无统计学意义(0.95 ±0.11比1.02 ±0.15,P＞0.05).miR-133b过表达组细胞增殖活力低于对照组(MTT:1.34 ±0.04比1.54±0.06,P＜0.01;克隆形成:8.67±3.06比17.67±2.52,P＜0.05);miR-133b/MMP-9同时过表达组细胞增殖活力高于miR-133b过表达组(MTT:1.66±0.05比1.34±0.04,P＜0.01;克隆形成:22.00±4.00比8.67±3.05,P＜0.05).结论 miR-133b可以靶向下调MMP-9的表达并抑制结直肠癌细胞增殖.