骨形成蛋白4在单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化中的作用

目的 探讨骨形成蛋白4(BMP4)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为腹腔注射生理盐水假手术组(saline-Sham,n=8)、腹腔注射生理盐水UUO组(saline-UUO,n=8)、腹腔注射抗BMP4抗体(anti-BMP4)假手术组(anti-BMP4-Sham,n=8)、腹腔注射anti-BMP4 UUO组(anti-BMP4-UUO,n=8).各组于手术日起每天给予anti-BMP4(200 μl/g·体重)或saline腹腔注射.于术后7d处死取材.免疫荧光观察正常小鼠肾脏BMP4的表达与分布;Masson染色观察肾间质纤维化;免疫组织化学观察肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原-Ⅲ(COL-Ⅲ)及p-Smad3的表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达.应用SPSS 18.0统计软件分析.计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,参数资料采用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间比较采用t检验.结果 正常小鼠肾组织表达BMP4,主要分布于肾小管.Masson染色显示,anti-BMP4-Sham组和saline-Sham组肾间质纤维化面积分别为(1.01±0.21)％比(0.81±0.19)％,两组间比较差异无统计学意义(t=0.983,P＞0.05);anti-BMP4 UUO组和saline-UUO组纤维化面积分别为(15.08±2.43)％比(21.23±3.19)％,anti-BMP4-UUO组胶原纤维明显减少,纤维化程度明显减轻(t=3.651,P＜0.01);免疫组织化学显示,anti-BMP4-Sham组和saline-Sham组α-SMA表达阳性面积分别为(1.51±0.35)％比(1.68±0.44)％、COL-Ⅲ分别为(0.84±0.22)％比(0.65±0.17)％、p-Smad3分别为(0.44±0.11)％比(0.71±0.28)％,各项指标在两组间比较差异无统计学意义(t=0.557,P＞0.05;t =0.896,P＞0.05;t=0.753,P＞0.05);anti-BMP4-UUO组和saline-UUO组α-SMA表达阳性面积分别为(9.11±1.03)％比(16.18±2.15)％、COL-Ⅲ分别为(7.08±0.83)％比(12.55 ±1.88)％、p-Smad3分别为(6.14±0.76)％比(11.66±1.91)％,anti-BMP4-UUO组各项指标表达均明显减少(t=2.991,P＞0.05;t=3.051,P＜0.01;t=2.753,P＜0.05);实时荧光定量聚合酶链反应显示,anti-BMP4-Sham组和saline-Sham组TNF-α mRNA和MCP-1 mRNA表达差异无统计学意义(t=0.661,P＞0.05;t =0.715,P＞0.05);与saline-UUO组比较,anti-BMP4-UUO组TNF-α mRNA、MCP-1 mRNA表达均明显降低(t=3.117,P＜0.01;t=3.762,P＜0.01),差异有统计学意义.结论 BMP4通过激活Smad3信号通路参与梗阻性肾病肾间质纤维化的进展,抑制BMP4可能作为抑制肾间质纤维化的治疗靶点.