大鼠肝癌细胞照射后非实质细胞影响肝癌细胞基因的变化

目的 探讨照射后微环境对残存的肝癌细胞转移能力影响及分子机制.方法 分离大鼠肝脏非实质细胞(NPCs),贴壁后进行照射,然后收集培养上清液与照射过的大鼠肝癌细胞McA-RH7777-6 Gy共培养.经不同培液上清共培养McA-RH7777-6 Gy细胞得到RH 6 Gy(与未照射NPCs上清液共培养)和RH 6 Gy-R(与照射后NPCs上清液共培养)细胞株.采用基因芯片技术检测RH 6 Gy和RH 6 Gy-R细胞中基因的表达.通过生物信息学对显著变化的基因进行分析,并利用DAVID数据库对这些变化的基因进行功能富集分析(GO-analysis)和信号转导通路富集分析(KEGG-analysis,BIOCARTA-analysis).进行细胞划痕实验,比较RH6Gy细胞和RH 6 Gy-R细胞的运动迁移能力.结果 基因芯片检测结果显示,RH 6 Gy-R与RH 6 Gy细胞比较,周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、丝裂原活化蛋白激酶9(MAPK9)、细胞周期蛋白(Cyclin)A、Toll/白细胞介素-1受体相关蛋白(TIRAP)、3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1/2(PDK1/2)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)等15个肿瘤发生发展相关基因的表达都显著高于未照射上清共培养组,且这些表达差异显著的基因多数富集在肿瘤转移相关通路,如腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、Ras信号转导通路等.体外划痕实验显示,细胞划痕培养48 h后,RH 6 Gy细胞面积愈合率为(9.00±1.35)％,RH 6 Gy-R细胞面积愈合率为(41.30 ±6.32)％.结论 经照射后的残存的肝癌表现出更强的转移能力,可能与其微环境中的NPCs相关,我们推测照射后的NPCs释放的某些细胞因子促进了肝癌残存细胞转移相关mRNA的表达,从而激活相关癌转移通路.