胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序岛区甲基化对微小RNA-129-2表达调控及肾癌细胞增殖和克隆形成的影响

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-129-2上游胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛区甲基化对其在肾癌中的表达调控,并探讨对肾癌细胞增殖和克隆形成能力的影响.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸盐处理测序法(BSP)检测miR-129-2上游CpG岛区的甲基化状态,探针法实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(Taqman-RT-PCR)检测miR-129-2的表达,噻唑蓝(MTT)法、平板克隆形成实验分别检测去甲基化对肾癌细胞增殖和克隆形成能力的影响.结果 MSP显示在肾癌组织中miR-129-2是高甲基化状态,同时BSP结果显示经去甲基化试剂处理后的肾癌细胞株(786-O、ACHN、Caki-1和796-P)中miR-129-2的甲基化程度降低[(66.16±6.20)％比(85.63±6.27)％、(66.20±6.55)％比(86.74±4.42)％、(59.00±4.58)％比(76.85±9.40)％、(63.13±6.07)％比(80.32±8.39)％;t=3.824,4.498、2.956、2.874;P=0.019、0.011、0.042、0.045];表达水平显著升高,与对照组比较分别为(0.107 ±0.001比0.059±0.005、0.084±0.007比0.027±0.005、0.173±0.006比0.151±0.050、0.114±0.006比0.079±0.004);t =9.793、11.897、3.093、7.566;P =0.001、0.000、0.036、0.002);与各对照组比较,786-0、ACHN和769-P细胞株在去甲基化试剂处理后对细胞增殖能力(0.97±0.16比1.42±0.13、1.34±0.09比1.76±0.06、0.92±0.04比1.16±0.07;t=3.804、6.329、5.220;P=0.019、0.003、0.006)和克隆形成能力[(69±3)个比(102±6)个、(57±5)个比(78±6)个、(91±5)个比(112±6)个;f=8.498、4.571、5.157;P=0.001、0.010、0.007]两个方面均减弱.结论 miR-129-2的表达受DNA甲基化调控,且与肾癌细胞的增殖和克隆形成能力密切相关.