趋化因子受体6在食管癌组织的表达及对食管癌细胞上皮-间充质转化的影响

目的 观察趋化因子受体6(CCR6)在食管癌组织的表达及其对食管癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 应用免疫组织化学技术检测99例食管鳞状细胞癌和11例食管正常组织中CCR6、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,分析其与临床病理特征的相关性.应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人食管癌细胞株ECA-109、TE-1及正常食管细胞株HEEC中CCR6的表达.应用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕和Transwell实验检测CCR6对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.应用RT-qPCR和Western blot实验测定CCR6-CCL20趋化作用对食管癌细胞EMT的影响.结果 CCR6在食管癌细胞株中高表达与正常食管细胞株中低表达,差异有统计学意义(8.00±1.23、4.57±1.12比1.00±0.32,t=11.000,P=0.000;t =6.100,P=0.001).CCR6在淋巴结转移组和未转移组的阳性表达率分别为87.1％和63.8％ (P =0.020);在TNM分期级别高组和级别低组的阳性表达率分别为87.9％和62.5％(P=0.038).食管癌细胞经CCL20刺激后,增殖能力显著降低,差异有统计学意义(0.35±0.02比0.49±0.03,t =7.003,P=0.002;0.38 ±0.033比0.48 ±0.04,t =3.719,P=0.021).ECA-109划痕24 h后,CCL20组的愈合速度显著升高,差异有统计学意义(1.34 ±0.02比1.00±0.04,t=4.680,P=0.009),封闭CCR6,愈合速度明显降低(1.36±0.06比1.00±0.04,t =4.344,P=0.012).ECA-109细胞Transwell实验结果显示:CCL20组细胞穿膜数量显著增高,差异有统计学意义(401.33 ±20.00比239.33 ±21.18,t=5.560,P=0.005);封闭CCR6后,穿膜细胞数量显著降低(311.33±12.12比401.33 ±20.00,t =3.849,P =0.018).CCL20刺激后,ECA-109中E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著降低(t =9.758,P=0.001)、Vimentin的表达显著升高(t=6.352,P=0.003);封闭CCR6,E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著升高(t=7.707,P=0.002)、Vimentin表达显著降低(t=6.095,P=0.004).结论 CCR6在食管癌淋巴结转移患者中呈高表达,CCR6及CCR6-CCL20趋化轴参与调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,可能参与调节食管癌细胞EMT的发生.