同位素稀释液相色谱串联质谱定量检测血清载脂蛋白E及其表型分型的方法学建立

目的 采用同位素稀释液相色谱串联质谱技术(ID-LC-MS),建立一种对血清载脂蛋白E定量检测并分型的方法.方法 方法学建立.以同位素标记精氨酸的肽段为内标,对标本进行变性、烷基化和胰蛋白酶酶解处理,液相色谱部分采用SB-C18色谱柱分离,质谱部分采用正离子模式和多反应监测定量和分型.评价该方法的精密度、准确度和线性范围等.收集上海市东方医院2018年10至12月40份血清标本对ID-LC-MS和免疫法进行方法学比较.Deming回归和Bland-Altman分析用于方法学比较.SPSS 24软件用于线性评价中的多项式回归分析.结果 ApoE的所选酶解肽段在4 h内即达释放峰值,SE肽段3 h时达到释放峰值.对ApoE分型发现E3/E3、E2/E3和E3/E4型.实验室内不精密度均值为5.2％.低浓度和高浓度准确性评价标本的测定值与靶值的相对偏差分别为7.6％和3.6％.与免疫法比对,Deming回归的截距的95％置信区间为6.44～11.44(P<0.05),斜率的95％置信区间为0.77～0.89(P<0.05),两者的相关性r=0.97.两者差值的均值是-2.95 mg/L,95％置信区间为-4.26～1.65 mg/L.本方法在16.9～58.5 mg/L内呈线性关系.结论 本研究建立的ID-LC-MS方法可用于定量血清ApoE,并对ApoE进行蛋白分型.