人血小板CD36转染细胞的建立及在CD36抗体检测中的应用

目的：通过TA克隆和细胞转染技术建立稳定表达人CD36的转染细胞,并应用于CD36抗体检测。方法提取人血小板总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增获得人血小板的CD36基因片段；TA克隆后转化TOP10 E. coli,蓝白斑筛选获得阳性重组子pcDNA3.1/V5-CD36,提取质粒DNA进行序列测定；将序列一致的质粒DNA在Effectene(Invitrogen)作用下转染HEK293T细胞；通过流式细胞仪分选建立稳定表达人血小板CD36的转染细胞,并利用该转染细胞对9份CD36抗体阳性标本进行流式和抗体捕获法(ACA)检测。结果获得稳定表达人血小板CD36的HEK293T转染细胞；与单克隆抗体捕获血小板抗原技术( MAIPA)相比,利用CD36转染细胞建立的流式和抗体捕获法( ACA)均可检出9份CD36抗体阳性标本,且操作简便。结论稳定表达人血小板CD36转染细胞的建立,为临床上CD36抗体的检测提供了有利工具,也为今后CD36在其他疾病中作用机制的研究提供实验资料。