MicroRNA-199a-3p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的抑制作用

目的:探讨MicroRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对脉络膜黑色素瘤细胞OCM290增殖的影响及机制.方法:实验研究.首先采用Real-time PCR技术检测miR-199a-3p在正常的脉络膜黑色素细胞UM96和肿瘤细胞OCM290中的表达情况;其次采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的转染方法,将miR-199a-3p转染入体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞OCM290中过表达作为实验组,将随机序列寡核苷酸链转染入OCM290细胞作为阴性对照组;然后在转染的基础上运用细胞增殖实验法(MTS法)、克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力.流式细胞术检测细胞周期.Western blot法检测与细胞周期相关的信号蛋白如CDK2、CDK4、E2F1等的表达.组间数据比较采用独立样本t检验.结果:miR-199a-3p在UM96中高表达,而在OCM290中表达明显下调(t=13.2,P<0.001).OCM290细胞转染miR-199a-3p后,MTS结果显示实验组细胞数为对照组的(23.8±1.7)％,细胞增殖明显被抑制(t=78.1,P<0.001);细胞克隆数减少;细胞周期滞留在G1期(t=-8.5,P=0.001);Western blot法检测发现miR-199a-3p能下调OCM290中CDK2、CDK4、E2F1等的表达水平(t=10.3,P=0.001;t=9.9,P=0.001;t=10.4,P<0.001).结论:miR-199a-3p通过下调调控细胞周期进程的关键蛋白,影响细胞周期的进程,从而抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖.