肝癌外泌体环状RNA-100338对血管内皮细胞成管能力的影响

目的:观察人肝癌(HCC)细胞外泌体环状RNA(circRNA)-100338对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管形成能力的影响。方法:提取、纯化和鉴定上海复旦大学肝癌研究所建立MHCC97H细胞来源外泌体，并共孵育中国科学院上海细胞所HUVEC细胞(37 ℃、5%CO 2)，外泌体示踪实验追踪外泌体能否被HUVEC细胞内化。采用Lipofectamine? 2000转染试剂转染MHCC97H细胞，提取干扰circRNA-100338后的HCC细胞上清液外泌体(1 g/L)；增殖实验用于检测HUVEC细胞增殖能力变化(测量波长450 nm)；血管形成能力实验用于评估HUVEC细胞成管(×100)。统计分析采用独立样本 t检验。 结果:透射电子显微镜观察到MHCC97H细胞来源的外泌体多数呈圆形或椭圆形，粒径分布峰值在120 nm，符合外泌体粒径特征，蛋白质印迹法(Western blot)检测到外泌体标志蛋白。MHCC97H细胞来源的外泌体被HUVEC细胞内化。肝癌circRNA-100338干扰组和对照组的外泌体分别共培养HUVEC细胞48、72、96 h后HUVEC细胞增殖[吸光度( A)值]分别为0.358±0.005和0.436±0.011，差异有统计学意义( t＝－16.227, P<0.01)、0.661±0.052和0.888±0.031，差异有统计学意义( t＝－ 9.146, P<0.01)及1.191±0.084和1.542±0.038，差异有统计学意义( t＝－9.296, P<0.01)，干扰组血管内皮细胞增殖能力和对照组比较显著下降，差异有统计学意义( P<0.05)。干扰组HUVEC成管能力下降，成管结节细小。 结论:肝癌外泌体circRNA-100338增强HUVEC细胞增殖能力，进而促进内皮细胞血管新生。