隐花色素基因1在骨肉瘤细胞中的作用

目的 探讨在人骨肉瘤细胞中沉默隐花色素基因1(CRY1)的作用及其机制.方法 将靶向CRY1基因的携带短发夹RNA(shRNA)表达的质粒通过慢病毒载体转入人骨肉瘤细胞株(HOS),以沉默人骨肉瘤细胞中CRY1基因.应用Western blot检测HOS细胞中CRY1基因的敲低效果;应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验明确CRY1基因敲低对骨肉瘤细胞生长的影响;应用Western blot技术检测CRY1下游基因的表达变化;应用实时荧光定量聚合酶链反应检测关键生物钟基因CRY1、隐花色素基因2(CRY2)、Period基因(PER1、PER2)、BMAL1、CLOCK mRNA的表达水平.结果 CRY1沉默组(0.839 ±0.020)较对照组(0.553 ±0.019)生长加快(P＜0.01),并且经典Wnt通路抑制分子糖原合成酶-3β (Gsk-3β)的磷酸化水平沉默组(1.105 ±0.052)较对照组(0.449±0.061)升高而导致其降解增加(P＜0.01),关键分子β-连环蛋白(β-catenin)的核内水平对照组(0.729±0.067)较沉默组(1.119 ±0.018)升高(P＜0.01);同时,HOS细胞中除CRY1基因的mRNA水平降低外,其余生物钟基因mRNA水平均升高;此外,挽救实验中HOS细胞生长受抑制(对照组:1.012 ±0.151,沉默组:1.483±0.095,过表达组:0.541±0.129,P＜0.01).结论 隐花色素基因CRY1能通过经典Wnt通路抑制骨肉瘤细胞的生长,并能影响生物钟网络关键基因CRY2、PER1、PER2、BMAL1、CLOCK的表达,提示该基因在骨肉瘤细胞中具有重要的调控作用.