阳离子高分子脂质体介导的 RNA 干扰技术对大鼠 CⅡTA 和 MHCⅡ基因表达的抑制作用

目的：研究应用阳离子高分子脂质体（ cationic polymeric liposomes ， CPLs ）介导的RNA干扰技术对大鼠CⅡTA（MHC class Ⅱ transactivator， CⅡTA）和MHCⅡ基因表达的抑制作用。方法构建CPLs及针对大鼠CⅡTA基因的shRNA（small hairpin RNA， shRNA）3个质粒，并将二者耦合成pCⅡTA-CPLs载体，分别设置空白对照组、单纯CPLs组、pHK-CPLs阴性对照组和3个pCⅡTA-CPLs干预组，于体外转染大鼠骨髓源树突状细胞（ dendritic cell ， DC），采用荧光实时定量PCR技术检测转染后DC的CⅡTA和MHCⅡmRNA转录水平，流式细胞学技术检测MHCⅡ蛋白表达水平。结果成功构建载shRNA质粒的CPLs，3个pCⅡTA-CPLs组DC转染后的CⅡTA与MHCⅡ mRNA转录水平及MHCⅡ蛋白表达水平均显著性降低（P＜0．01），其中一组pCⅡTA-CPLs 对CⅡTA与MHCⅡ基因表达的抑制更为明显。结论 CPLs是一种较为理想的基因转运载体，应用针对大鼠CⅡTA基因的载shRNA质粒的CPLs载体在体外能够显著性抑制CⅡTA和MHCⅡ基因表达，本实验成果的取得为下一步体内实验提供了实验资料。