RhoA在富氢液减轻脂多糖诱发人肠屏障功能障碍中的作用:离体实验

目的 评价RhoA在富氢液减轻脂多糖(LPS)诱发人肠屏障功能障碍中的作用.方法 将Caco-2细胞以2×105个/ml的密度接种于transwell小室,每孔400μl,采用随机数字表法,将其分为5组(n=50):对照组(C组)、富氢液组(H2组)、LPS组、LPS+富氢液组(LPS+HRS)组和LPS+ RhoA抑制剂C3胞外酶组(LPS+C3组).H2组和LPS+HRS组用含0.6 mmol/L富氢液的培养基培养,LPS组、LPS+HRS组和LPS+C3组加入LPS 100 μg/ml;于加入LPS前1h时,LPS+C3组加入C3胞外酶2.5 μg/ml.每组分别于LPS孵育前即刻、3、6、12、24、36、48 h时取5孔,测定上皮细胞电阻(TEER)和渗透系数(PE),每组于LPS孵育24 h时取5孔,采用Western blot法和免疫荧光法测定occludin与E-cadherin的表达,采用GST pull-down法测定RhoA活性.结果 与C组比较,LPS组、LPS+HRS组和LPS+C3组LPS孵育6-48 h时TEER降低,PE和RhoA活性升高,occludin和E-cadherin的表达下调(P＜0.05);H2组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与LPS组比较,LPS+ HRS组和LPS+C3组LPS孵育6-48 h时TEER升高,PE和RhoA活性降低,occludin和E-cadherin的表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+HRS组和LPS+C3组occludin和E-cadherin在细胞膜处分布部分增多,在细胞质中分布减少,“铁丝网”样形态的连续性与完整性部分恢复.结论 富氢液可减轻LPS诱发人肠屏障功能障碍,其机制与抑制RhoA激活,从而上调occludin和E-cadherin的表达及抑制其分布紊乱有关.