分泌型钙激活Cl-通道在ARDS小鼠肺组织表达的变化及规律

目的 观察小鼠分泌型钙激活Cl-通道(mCLCA3)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型肺组织中的表达量及随时间的变化规律,探究其在急性肺损伤过程中的作用.方法 18只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和脂多糖(LPS)组ARDS小鼠(分为气道滴入LPS诱导6h组、24 h组),每组6只.HE染色观察小鼠肺组织形态结构改变,并进行肺损伤评分;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察小鼠气道上皮中杯状细胞的数量;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肺组织中mCLCA3的mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)法检测mCLCA3蛋白在ARDS小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)中的表达.结果 HE染色结果,与对照组相比,LPS组ARDS小鼠肺部正常结构明显被破坏,肺泡上皮呈弥漫性损伤,肺泡内出血并伴有大量炎性细胞浸润,肺间质蛋白质沉积,有透明膜形成;与对照组小鼠相比较,LPS组ARDS小鼠的肺损伤评分(对照组:1.40±0.54;LPS组:7.40±0.54,P＜0.05)显著升高;AB-PAS染色观察小鼠气道上皮中杯状细胞的数量;real-time RT-PCR (RT-qPCR)和Western blot结果显示:相比于对照组小鼠,LPS组ARDS小鼠的肺组织中mCLCA3的基因表达量明显下降(P＜0.05);mCLCA3蛋白在ARDS小鼠的肺组织和BALF中均显著降低,且差异有统计学意义(P＜0.05),且下降水平呈时间依赖性.结论 LPS诱导的ARDS小鼠模型中气道杯状细胞数量明显增加,而其肺组织及BALF中mCLCA3的mRNA及蛋白表达水平(评分)均明显下降,并表现为时间依赖性.气道杯状细胞产生的分泌型CLCA表达水平与ARDS损伤程度呈负相关,提示前者可能在肺部炎症机制中扮演着负性调节作用.