异丙酚对转染Cx32/Cx26的宫颈癌HeLa细胞缝隙连接功能的影响

目的 观察不同浓度异丙酚对转染缝隙连接蛋白32/缝隙连接蛋白26(Cx32/Cx26)的宫颈癌HeLa细胞缝隙连接功能的影响.方法 将已构建好含有Cx32/Cx26的质粒PBI转染入HeLa细胞,经1200μg/ml的G-418筛选,多西环素诱导48 h,用细胞接种荧光示踪法验证上述转染的HeLa细胞均能够形成有效的缝隙连接.挑选可稳定表达Cx32/Cx26的HeLa细胞株培养扩增,将培养的细胞接种于12孔板,接种密度8×104/ml,培养48 h.随机分为6组(n=9):正常对照组(C组)、脂肪乳剂组(E组)、缝隙连接通道阻断剂组(18-α-GA组)、不同浓度异丙酚组(P1组～P3组).用荧光指示剂负载细胞.将负载细胞液加入各组细胞培养孔中,同时分别给予异丙酚1.3μg/ml(P1组)、2.2μg/ml(P2组)、3.2μg/ml(P3组)、脂肪乳剂10μg/ml(E组)和18-α-GA 1.0μg/ml(18-α-GA组)孵育4 h.采用荧光示踪法计数负载细胞周围的HeLa细胞数量,计算荧光示踪剂传递率和抑制率.结果 与C组比较,18-α-GA组、P1组、P2组、P3组HeLa细胞数量减少,荧光示踪剂传递率降低,抑制率升高(P＜0.05),E组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与18-α-GA组比较,P1组、P2组HeLa细胞数量增多,荧光示踪剂传递率升高,抑制率降低(P＜0.05),P3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).随异丙酚浓度增加,HeLa细胞数量减少,荧光示踪剂传递率降低,抑制率升高(P＜0.05).结论 异丙酚呈浓度依赖性地抑制转染Cx32/Cx26的HeLa细胞的缝隙连接功能.