热损伤角质形成细胞培养上清对真皮成纤维细胞增殖与胶原mRNA表达的影响

目的 观察热损(创)伤后角质形成细胞(KC)培养上清对真皮成纤维细胞(Fb)增殖与胶原mRNA表达的影响.方法 建立KC热损伤模型,收集正常及热损伤12 h后培养上清配制不同浓度的细胞条件培养液;分离培养人正常Fb,实验组分别加入含不同浓度的细胞条件培养液,以单纯DMEM组为对照,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定24 h后真皮成纤维细胞增殖;分别以流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定DMEM组、50%浓度条件培养液组相同时间Fb生长周期及Ⅰ型胶原mRNA表达.结果 细胞增殖测定:热损伤上清(10%、30%、50%、70%)条件培养液组A值(0.151±0.004、0.165±0.009、0.195±0.006、0.202±0.008)均高于正常上清(10%、30%、50%、70%)条件培养液组(0.144±0.004,0.159±0.002,0.180±0.005,0.181±0.006)及对照组(0.144±0.007),除10%浓度组外各实验组A值与对照组比较差异均有统计学意义(t值分别为:4.01、11.42、11.41;P＜0.05),热损伤上清与正常上清条件培养液组比较:50%、70%浓度组间差异有统计学意义(t值分别为:2.03、1.94;P＜0.05);热损伤上清条件培养液50%与70%浓度组间差异无统计学意义(t值为1.34;P＞0.05).细胞周期测定见50%浓度热损伤上清组可明显促进Fb通过G1/S及S/G2限制点,S期及G2/M期细胞与对照组比较增多,G0/G1期细胞与对照组比较明显减少(t值分别为:5.87、11.3、4.86;P＜0.05).Ⅰ型胶原mRNA表达测定中,50%浓度热损伤上清组与对照组比较表达明显上调,差异亦有统计学意义(t=1.72;P＜0.05).结论 热损(创)伤后KC上清液可促进Fb的增殖,同时可上调Ⅰ型胶原mRNA的表达.