核内不均一核糖核蛋白与肾母细胞瘤增殖及凋亡的关系

目的 探讨核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,HnRNPL)在肾母细胞瘤中的表达及其与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系.方法 对3例肾母细胞瘤组织进行全转录组测序了解肿瘤差异表达基因,对差异基因进行GO分析和KEGG分析,并用qPCR检测验证HnRNPL在肾母细胞瘤中的表达情况.采用siRNA干扰肿瘤细胞HnRNPL的表达,设置转染组(转染siRNA)、空白组(不转染siRNA)及阴性对照组(转染NC-siRNA),用qPCR及Western Blot检测干扰后HnRNPL、P53和BCL2基因及蛋白的表达情况,用MTT法和流式细胞术检测干扰后肿瘤细胞的增殖及凋亡情况.采用RNA免疫共沉淀检测HnRNPL蛋白与P53 mRNA的相互作用关系.结果 全转录组测序显示肾母细胞瘤组织中有748个基因差异表达.通过GO功能显著性富集分析发现:差异基因参与的生物进程主要是生化活动调节、细胞增殖、系统分化、RNA多聚酶Ⅱ转录调节等.通过KEGG显著性富集分析发现:差异基因参与的与肿瘤进程相关的信号通路主要是白细胞跨内皮迁移信号通路、p53信号通路、肿瘤转录调控异常等.qPCR检测证实HnRNPL在肾母细胞瘤组织中表达上调,与芯片测序结果一致.HnRNPL-siRNA干扰肿瘤细胞后,qPCR检测显示转染siRNA组的HnRNPL、p53和Bcl2mRNA相对表达量分别为0.348 5±0.019 7、0.248 5±0.035 5和0.372 2±0.014 2,阴性对照组分别为1.143 1±0.071 6、0.976 1±0.118 6和0.9060±0.032 3,空白对照组分别为1.1980±0.126 3、1.008 3±0.112 3和1.013 1±0.106 7,转染组与阴性对照组和空白对照组的组间差异有统计学意义(P＜0.05及P＜0.01).Western Blot检测显示siRNA转染组中HnRNPL、p53和Bcl2蛋白相对表达量分别为0.131 5±0.005 7、0.466 2±0.043 3和0.185 1±0.0231,阴性对照组分别为0.370 2±0.006 2、0.744 4±0.0206和0.8463±0.0020,空白对照组分别为0.399 9±0.0234、0.819 3±0.0201和0.993 5±0.058 7,转染组与阴性对照组及空白对照组比较,差异有统计学意义(P均＜0.05).MTT法检测显示siRNA转染组肿瘤细胞的生长曲线24、48和72 h的吸光度分别为0.457 5±0.061 2、0.552 7±0.033 2和0.662 5±0.005 7,阴性对照组分别为0.653 3±0.011 2、0.797 4±0.002 1和0.901 1±0.014 7,空白对照组分别为0.687 9±0.013 2、0.813 4±0.0231和0.913 1±0.071 2,转染组各个时间段与阴性对照组和空白对照组之间差异均有统计学意义(P均＜0.05).流式细胞术检测结果显示,siRNA转染组肿瘤细胞凋亡率为(37.57±2.30)％,远高于空白对照组(2.01±0.33)％及阴性对照组(3.46±0.41)％,组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).RIP检测显示,HnRNPL蛋白能与p53 mRNA相互作用.结论 HnRNPL可能通过与p53 mRNA特异性的结合调控P53的表达,并通过p53相关信号通路参与了肿瘤细胞的增殖与抗凋亡过程.