小胶质细胞在脊髓脊膜膨出胎鼠神经损伤中作用的初步探索

目的 通过揭示脊髓脊膜膨出(myelomeningocele,MMC)胎鼠小胶质细胞在脊髓内时空分布及相关神经元凋亡因子,以探讨脊柱裂患儿神经损伤的机制.方法 将妊娠SD大鼠按随机数字表法分为:实验组(21只)和对照组(12只),实验组孕鼠于妊娠第10天(E10)以维甲酸60mg/kg一次性灌胃,对照组孕鼠同期等量橄榄油灌胃;胚胎第16、18、20、22天(E16、E18、E20、E22)行剖宫产取出胎鼠,将实验组具有MMC表型的胎鼠记为MMC组,将对照组胎鼠记为CRL组,记录胎鼠的成模率、头臀长、体重,HE染色观察其形态学改变,Iba1免疫组化染色观察其时间表达趋势,免疫荧光检测E20 Iba1是否与TNF-α共染;蛋白质印迹法检测E20 Iba1、TNF-α、IL-1β,Cleaved caspase-3相关蛋白的表达.结果 暴露于维甲酸的孕鼠,其子代MMC的发生率为63.7%,MMC胎鼠在宫内发育迟缓,E16～E22各时间段头臀长及体重均较CRL组小(P<0.05).免疫组化示,MMC胎鼠的脊髓在胚胎早期(E16和18)Iba1的表达呈点状分布与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),E20和E22 MMC组Iba1表达上调,相较于CRL组,差异具有统计学意义(P<0.05),同时E20和E22 MMC组较E18 MMC组Iba1的表达明显上调(P<0.05).免疫荧光显示E20 MMC组在脊髓损伤部位增多的TNF-α与浸润的小胶质细胞共染.蛋白质印迹法检测E20 Iba1及炎症凋亡因子(TNF-α,IL-1β、Cleaved caspase-3)较CRL组的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 小胶质细胞在MMC胎鼠脊髓中的异常活化,可能是促进脊髓损伤的因素之一.