西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响

目的：探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组（单纯DMEM培养基处理）、二甲基亚砜（DMSO）组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、平衡盐溶液（EBSS）组。作用4 h后，Western印迹检测A431细胞和HeLa细胞自噬微管相关蛋白轻链3A/3B（LC3A/B）、重组人γ?氨基丁酸受体相关蛋白（GABARAP）的表达水平。吖啶橙染色分析细胞自噬体表达水平。结果 Western印迹检测显示，对照组与DMSO组A431细胞中LC3A/B?Ⅱ与LC3 A/B?Ⅰ比值差异无统计学意义（P>0.05）；20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、EBSS组LC3 A/B?Ⅱ与LC3 A/B?Ⅰ比值较对照组均明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。HeLa细胞Western印迹检测结果与A431细胞类似。双变量相关性分析显示，HeLa细胞中LC3A/B?Ⅰ与GABARAP表达呈正相关（r=0.869，95%CI：0.807~0.999，P=0.051），LC3A/B?Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r=-0.742，95%CI：-0.982~0.406，P=0.042）；A431细胞中LC3A/B?Ⅰ与GABARAP表达亦呈正相关（r=0.837，95%CI：-0.173~0.989，P=0.037），LC3A/B?Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r=-0.684，95%CI：-0.977~0.500，P=0.047）。吖啶橙染色显示，A431细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（23.750%±0.260%）与EBSS组（32.450%±0.488%）同样高于对照组（15.987%±0.242%，均P <0.05）；HeLa细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（33.307%±0.715%）和EBSS组（66.097%±1.141%）高于对照组（14.117%±0.295%，均P<0.05）。结论经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平，GABARAP蛋白可能与LC3A/B高度相关。