端粒酶阴性肿瘤细胞株U2OS中Ku80表达抑制模型的建立及其对放射敏感性的影响

目的 探讨Ku80在端粒酶阴性肿瘤细胞中与端粒和放射敏感性的关系.方法 构建重组表达质粒pshRNA-Ku80,转染U2OS细胞,并筛选稳定表达的转化克隆.RT-PCR和Westernblot分别在基因和蛋白水平检测干扰前后Ku80表达量的变化.定时PCR检测干扰前后端粒长度的变化.克隆形成实验分析pshRNA-Ku80干扰对U2OS细胞放射敏感性的影响.结果 流式细胞仪检测重组质粒稳定转染细胞株的转染效率为(83.23±7.63)％.PCR结果显示,重组质粒组Ku80基因抑制率为(68.09±1.16)％.Western blot结果表明,重组质粒组Ku80蛋白抑制率达到(11.03±2.45)％.端粒长度检测结果显示,重组质粒组的端粒长度(1.07±0.07)明显短于空白组(4.42±1.30) (F =38.58,P＜0.05),而空质粒组端粒长度(4.11±0.84)与空白组无明显变化.克隆形成实验结果显示,重组质粒组细胞株SF2值较空白组降低显著(F=1089.61,P＜0.05),放射增敏比(SER)为1.47.结论 运用RNAi技术所建立的Ku80表达抑制的细胞模型,可用于以后的基因功能研究；在U2OS中,特异性地沉默Ku80会引起端粒长度的缩短,并增加U2OS细胞的放射敏感性,推测pshRNA-Ku80引起端粒缩短很可能是其放射增敏的机制之一.