MSC介导的PTEN基因体外作用于人DBTRG胶质瘤细胞的实验研究

目的 将人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)转染间充质干细胞(MSC),检测MSCPJEN细胞基因产物的表达及其培养上清对人DBTRG胶质瘤细胞的作用.方法 原代培养人脐带MSC,将PTEN基因表达质粒pDsRed-PTEN转染MSC,培养48 h后荧光显微镜观察转染效果.将转染后MSCPTEN作为实验组,单纯MSC作为对照组.RT-PCR、Western blotting、ELISA分别检测2组细胞PTEN基因、蛋白及上清液中分泌性PTEN蛋白的表达;将体外培养的DBTRG细胞分为4组,分别加入MSC上清液和比例为25％、50％、100％的MSCPTEN上清液,继续培养24h,细胞活性/细胞毒性试剂盒(CalceinAM/EthD-1染色)观察4组细胞的活性;将体外培养的DBTRG细胞分为3组,分别加入MSC上清液和比例为25％、100％的MSCPTEN上清液,实时细胞记录仪(RTCA)检测DBTRG细胞的生长曲线. 结果 荧光显微镜下显示大量红色荧光位于MSCPTEN细胞胞内;RT-PCR、Western blotting检测发现,实验组细胞PTEN基因、蛋白的表达高于对照组.ELISA检测显示实验组细胞上清液中PTEN含量[(1.514±0.389) ng/mL]高于对照组[(0.508±0.197)ng/mL],差异有统计学意义(P＜0.05);CalceinAM/EthD-1染色显示,25％、50％、100％ MSCPTEN上清液组DBTRG细胞死亡数量较MSC上清液组明显增多,且随着MSCPTEN上清液比例的增加,死亡细胞的数量增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);RTCA检测显示,在加入不同上清液20 h左右,与MSC上清液组比较,25％ MSCPTEN上清液组DBTRG细胞指数明显下降,100％ MSCPTEN上清液组DBTRG细胞指数显著下降. 结论 PTEN质粒转染MSC后MSCPTEN细胞能够稳定表达目的基因,其培养上清液明显促进人DBTRG胶质瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞生长,MSC介导的PTEN基因可能成为胶质瘤基因治疗的一种有效方法.