多重荧光定量PCR对三种主要致病性曲霉菌的检测研究

目的 建立一种能同时鉴定烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌的多重荧光定量PCR诊断方法,并将之应用于侵袭性曲霉菌病的诊断研究.方法 构建多重荧光定量PCR方法,对该方法进行实验评价,并将之应用于侵袭性曲霉菌病患者的痰标本检测,初步评价该方法的临床诊断效能.结果 建立的多重荧光定量PCR方法,制定标准曲线,R2在0.989～0.999之间,斜率分别为-3.117、-3.583、-3.674；只与烟曲、黄曲、黑曲的DNA发生特异性反应,无非特异性扩增；最低检测浓度为1×102孢子/ml;重复性检测试验,获得Ct值标准差为0.12～0.20,变异系数为0.37％～0.80％；对分离自26例侵袭性曲霉菌病患者的56份深部痰标本进行检测,敏感率为85.7％(48/56),特异性为92.0％(46/50),阳性预测值为92.3％(48/52),阴性预测值为85.2％(46/54).结论 研究建立的多重荧光定量PCR方法检测侵袭性曲霉菌病患者的深部痰标本有较高的敏感性、特异性和阴、阳性预测值,且快速、简便,将有助于侵袭性曲霉菌病的早期准确诊断.