抗菌药物浓度对整合子内耐药基因盒重组效率影响的研究

目的 研究在不同浓度链霉素下,aadA2基因盒在整合子attI位点的整合频率.方法将已知序列的1类整合子克隆到pACYC184质粒,该重组质粒命名为pACIDA;将该整合子上的整合酶基因克隆到pET28a质粒,该重组质粒命名为pETINT;这两重组质粒依次转化大肠杆菌BL21(DE3).转化后的大肠杆菌在加不同浓度的链霉素的LB液体培养基中,37℃过夜培养.使用荧光定量PCR技术分别测定aadA2基因盒在attI位点发生整合作用的整合子的拷贝数和总整合子的拷贝数,前者除以后者即可获得整合频率.结果高表达整合酶的情况下,在加入的链霉素浓度分别为0、20、30、40、50μg/ml时,aadA2基因盒在attI位点的整合频率依次为(1.97±0.24)×10-3、(3.23±1.77)×10-3、(3.27±0.67)×10-3、0.45±0.13、1.32±0.11.而在没有整合酶高表达的情况下背景频率低于(1.75±0.33)×10-7.结论高浓度的链霉素能够促进整合子中aadA2基因盒在整合子中attI位点的重组效率.