携带VGLUT3-shRNA重组慢病毒的制备和鉴定
Chinese journal of experimental surgery（2012）
摘要
目的 制备携带谷氨酸转运体3( VGLUT3)基因小分子干扰RNA的重组慢病毒.方法 设计合成短发卡RNA (shRNA) VGLUT3对应的两条互补的寡核苷酸链,mU6-MCS-Ubi-EGFP质粒经Hpa Ⅰ和Xho Ⅰ进行双酶切与退火后的寡核苷酸连接,目的质粒转化感受态细胞,对克隆的菌落行聚合酶链反应(PCR)鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序,测序正确的重组质粒转染293细胞,同源重组产生Lentivirus-VGL UT3-shRNA并测定病毒滴度.结果 病毒滴度为1.5 × 109 TU/ml.结论 成功制备携带VGLUT3-shRNA的重组慢病毒.
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