PI3K/AKT信号通路在一氧化氮对肠神经干细胞增殖分化中的作用

目的 通过抑制PI3K/AKT信号通路,探讨该信号通路在一氧化氮对体外培养的大鼠肠神经干细胞增殖、分化的调控情况.方法 从孕15d胚鼠肠道提取肠神经干细胞,传代后的肠神经干细胞分为LY294002(25 μmol/L)组、LY294002(50μmol/L)组及空白对照组,培养48 h后,形态学观察分析各组的神经球大小情况,流式细胞仪检测各组肠神经干细胞nestin、BrdU标记的增殖细胞、子代细胞神经元Tuj-1染色阳性细胞百分比;传代后的肠神经干细胞分为50 μmol/l DETA/NO+ 20 ng/ml EGF组、100 μmol/L L-NAME+ 20 ng/ml EGF组及空白对照组(20 ng/ml EGF),培养1 h后,利用Western Blot法检测及gel-pro图像软件分析各组P-AKT磷酸化水平.结果 形态学观察发现LY294002(50 μmol/L)组神经球较小、部分细胞有退化现象、LY294002 (25 μmol/L)组次之、空白对照组神经球较大;流式检测发现LY294002 (25 μmol/L)组与空白对照组相比,肠神经干细胞nestin百分比显著降低[(18.42±1.22)％比(27.44±1.08)％,(P＜0.05)],BrdU标记的增殖细胞百分比显著降低[(2.20±0.30)％比(12.27±0.59)％,(P＜0.05)],神经元Tuj-1百分比显著增加[(17.23±0.78)％比(13.98±0.53)％,(P＜0.05)];而LY294002(50 μmol/L)组与空白对照组相比,肠神经干细胞nestin百分比[(8.77±0.90)％比(27.44±1.08)]、BrdU标记的增殖细胞百分比[(0.62±0.03)％比(12.27±0.59)]及神经元百分比[(9.88±1.22)％比(13.98±0.53)％]差异均有统计学意义(P＜0.05).Western Blot法检测发现100 μmol/L L-NAME+ 20 ng/ml EGF组pAKT磷酸化的程度显著增强[(15.71±1.09)％比(39.42±1.02)％,P＜0.05],50 μmol/l DETA/NO+ 20 ng/ml EGF组显著降低[(58.44±1.73)％比(39.42±1.02)％,P＜0.05].结论 一氧化氮能抑制肠神经干细胞增殖、促进其向神经元分化,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关.