链接蛋白-4在食管癌组织的表达及临床意义

目的 观察链接蛋白-4(Nectin-4)在人食管癌组织及邻近正常组织的表达,分析其表达水平与食管癌患者临床病理特征及预后的关系.探讨Nectin-4干预对人食管癌细胞株的功能调节作用.方法 采用免疫组织化学染色法检测食管癌组织芯片中94例食管癌和78例相邻癌旁正常组织Nectin-4的表达,采用秩和检验比较食管癌及癌旁正常组织中Nectin-4表达水平的差异,x2检验分析食管癌组织中Nectin-4表达水平与患者临床病理特征的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系.选用人食管癌细胞株Eca-109和TE-1,经RNA干扰(RNAi)技术构建Nectin-4稳定下调及过表达细胞株,分别通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、划痕实验及Transwell实验探讨Nectin-4干预对上述食管癌细胞株生物学功能的调节作用.结果 Nectin-4在食管癌组织中高表达,在正常组织中以不表达和低表达为主,在癌组织及癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.01).肿瘤最大直径≥4.5 cm的食管癌患者其Nectin-4高表达比率高于最大直径＜4.5 cm的患者,差异有统计学意义(x2=6.385,P＜0.05).T分期为Ⅲ+Ⅳ的食管癌患者其Nectin-4高表达比率高于TNM分期为Ⅰ+Ⅱ的食管癌患者,差异有统计学意义(x2=5.822,P＜0.05).Nectin-4染色强度与患者其他临床病理特征无相关(P＞0.05).多因素Cox比例风险模型显示,Nectin-4表达水平[风险比(HR)=1.795,95％可信区间(CI):1.042 ～3.092,P＜0.05]可作为食管癌患者独立预后因素.经过RNAi及慢病毒转染,选用Eca-109和TE-1成功构建Nectin-4稳定下调表达细胞株LV-Nectin-4-短发卡RNA(shRNA)和Nectin-4过表达细胞株LV-Nectin-4-OE.CCK-8实验显示,LV-Nectin-4-shRNA组细胞的增殖率显著低于LV-NC组细胞(Eca-109,48 h:P ＜0.01,72 h:P ＜0.05;TE-1,24h:P＜ 0.01,48 h:P＜ 0.01,72 h:P＜ 0.01),LV-Nectin-4-OE组细胞增殖率显著高于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109,48 h:P ＜0.05,72 h:P＜0.05;TE-1,48 h:P ＜0.01,72 h:P ＜0.05).划痕实验显示,LV-Nectin-4-shRNA组细胞迁移能力显著低于LV-NC组(Eca-109,24 h:P＜ 0.05;TE-1,24 h:P＜ 0.01);LV-Nectin-4-OE组细胞迁移能力显著高于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109,24 h:P＜0.01;TE-1,24h:P ＜0.05).Transwell侵袭实验显示,LV-Nectin-4-shRNA组细胞侵袭数量显著低于LV-NC组(Eca-109,P＜0.05;TE-1,P＜0.01);LV-Nectin-4-OE组细胞侵袭数量显著高于LV-Vector-Ctrl 组(Eca-109,P＜0.01;TE-1,P＜0.01).皮下移植瘤实验证实,敲除Nectin-4表达可以显著抑制肿瘤生长(Eca-109,P＜0.01;TE-1,P＜0.01);LV-Nectin-4-shRNA组肿瘤组织重量显著轻于LV-NC组(Eca-109,P＜0.05;TE-1,P＜0.01);LV-Nectin-4-OE组肿瘤组织重量显著重于LV-Vector-Ctrl组(Eca-109,P＜0.018;TE-1,P＞0.05).结论 Nectin-4在食管癌组织中高表达,表达水平与食管癌患者肿瘤大小、T分期密切相关,Nectin-4高表达可作为食管癌患者预后评判的独立风险因素,提示Nectin-4参与食管癌的发生与进展.人食管癌细胞中下调Nectin-4表达可抑制细胞活力、迁移和侵袭的能力,上调Nectin-4表达可增强细胞活力、迁移和侵袭的能力.