新生小鼠炎症-缺氧缺血脑损伤模型的建立

目的 建立新生小鼠炎症-缺氧缺血脑损伤模型.方法 本研究采用3d龄C57 BL/6小鼠,每组有3个独立检测指标,每个实验指标各6只,共144只.3d龄新生小鼠腹腔内分别注射0.05 mg/kg、0.50 mg/kg的脂多糖(LPS),24h后检测小鼠体重增长情况,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死情况,苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理情况,以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测脑组织细胞凋亡指数,根据结果确定一个对小鼠损伤不明显的剂量(即亚损伤剂量).3d龄新生小鼠结扎左侧颈总动脉后,置于8％ O2缺氧舱分别缺氧(HI)20、40 min,24 h后检测小鼠体重、脑组织TTC、HE以及TUNEL染色,根据结果确定一个对小鼠脑损伤不明显的时间(即亚损伤时间).最后,3d龄新生小鼠分为两组:实验组(LPS± HI组)及对照组(Sham组).根据上述实验得出的结果,实验组小鼠予亚损伤剂量的LPS,2h后再给予亚损伤的缺氧缺血时间;对照组给予磷酸盐缓冲液(PBS)腹腔内注射,2h后假手术处理且不缺氧.24 h后检测小鼠体重,脑组织TTC、HE以及TUNEL染色.应用SPSS 23.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),方差齐性资料两两比较用SNK检验;方差不齐资料两两比较用Dunnett's T3检验.两组间比较采用t检验.结果 LPS 0.05 mg/kg组体重[(2.81±0.14)g]与PBS组[(2.81±0.16)g]比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而LPS 0.50 mg/kg组体重[(2.63±0.09)g]较PBS组轻,差异有统计学意义(P＜0.05).HI 20组新生小鼠未见明显脑梗死及少量细胞凋亡[(2.80±1.74)％],HI 40组新生小鼠大脑出现脑梗死灶及大量的细胞凋亡[(55.67±7.81)％].最后,实验组(LPS+ HI组)体重[(2.66±0.09)g]较Sham组[(2.83 ±0.12)g]轻,差异有统计学意义(t=2.565,P＜0.05),同时LPS+ HI组TTC染色显示明显脑梗死灶,HE染色显示神经细胞病理损伤形态,TUNEL法显示神经细胞凋亡LPS+ HI组[(52.17±9.50)％]比Sham组[(2.15±1.30)％]显著增加,差异有统计学意义(t=12.873,P＜0.05).结论 LPS联合HI可加重新生小鼠脑损伤,提示炎症可对未成熟脑缺氧缺血性损伤起增敏作用.