反复长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤机制探讨

目的 探讨反复长波紫外线(UVA)照射对人皮肤成纤维细胞DNA损伤、修复及复制过程的影响及机制.方法 自中山大学附属第三医院泌尿外科3例儿童包皮环切术后包皮组织中分离培养成纤维细胞,随机分为UVA组和对照组,UVA组接受连续UVA照射诱导慢性光损伤,对照组不接受UVA照射,通过MTT法、β半乳糖苷酶染色及流式细胞仪分别检测细胞活性、老化比率和凋亡率.逆转录法建立差异表达cDNA基因谱库,高通量测序,比较对照组与UVA组cDNA测序结果,分析差异表达基因.两独立样本均数比较采用独立样本t检验.结果 UVA组细胞活性(72.0％±5.2％)明显低于对照组(96.0％±3.7％),t=6.51,P＜0.05;细胞老化率(79.7％±5.2％)高于对照组(6.4％±0.8％),t=24.12,P＜0.05;细胞凋亡率(29.0％±3.3％)高于对照组(6.0％±5.9％),t=5.89,P＜ 0.05.在DNA错配修复过程、DNA复制和DNA碱基切除修复过程的关键酶中,细胞DNA连接酶(Lig)1表达量在UVA照射组下调为对照组的0.47±0.13,核糖核酸酶(RNase) H2A下调为0.44±0.07,解旋酶Dna2下调为0.49±0.11,两组间表达差异均有统计学意义(均P＜0.01).UVA诱导人皮肤成纤维细胞慢性光损伤后,在DNA碱基修复过程,Lig表达下调导致DNA单碱基修复受阻,Lig及Lig1表达下调,导致DNA多碱基修复过程受阻;在DNA错配修复过程,Lig1基因表达下调,修复过程受阻;在DNA复制过程,RNaseH2A、Dna2、Lig1表达下调,复制过程受阻.结论 反复UVA照射可改变皮肤成纤维细胞DNA碱基切除修复、DNA错配修复及DNA复制过程中关键酶的表达,从而影响皮肤成纤维细胞DNA修复及DNA复制过程.