乳腺癌区域淋巴结来源树突状细胞的分离和培养

目的 探讨乳腺癌区域淋巴结来源树突状细胞(DC)的分离和培养及其用于抗肿瘤免疫治疗的可能性.方法 选取21例乳腺癌患者术中新鲜无转移淋巴结组织,机械破碎制成细胞悬液,密度梯度离心和贴壁法分离DC.体外分3组培养,A组不加细胞诱导因子,B组加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF,1000 U/ml)和重组人白细胞介素(rhIL)-4 (500 U/ml),C组加入rhGM-CSF(1000 U/ml)、rhIL-4(500 U/ml)和肿瘤坏死因子(TNF)-α (200 U/ml).倒置显微镜下观察DC的细胞形态、大小及其变化,流式细胞术检测DC表型.结果 平均每例5～12枚半个淋巴结可获得DC (52.84±20.87)×105个,其纯度达(73.78±13.31)％,经培养后这些细胞具有DC的形态特征.培养7d后,3组DC的纯度和数量均大于第2天,差异有统计学意义(P＜0.05)；3组CD1a+CD83-细胞数量与第2天比较差异均无统计学意义(P＞0.05),3组CD1a+ CD83+细胞和CD1a-CD83+细胞的数量均分别大于第2天,差异有统计学意义(P＜0.05)；3组CD1a+ CD83-、CD1a+ CD83+和CD1a-CD83+3类细胞的增长速率经方差分析差异均有统计学意义(P＜0.05),两两比较,3组CD1a+CD83+细胞和CD1a-CD83+细胞增长速率均大于CD1a+CD83-细胞,差异有统计学意义(P＜0.01).7d后,DC、CD1a+ CD83-细胞、CD1a+CD83+细胞和CD1a-CD83+细胞数量及其增长速率在3组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 可从乳腺癌区域淋巴结中分离出较大数量和较高纯度的DC,经过体外培养可获得较多具有树突状形态特征的成熟DC.