多巴胺对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的影响

目的 探讨多巴胺对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(MPMs)炎症反应的影响.方法选择28只C57雄性Toll样受体4(TLR4)基因野生型(TLR4+/+)小鼠和6只雄性TLR4基因缺失型(TLR4-/-)小鼠,随机进行腹腔注射巯基乙酸盐肉汤,获取原代MPMs.(1)TLR4+/+MPMs.分为对照组、LPS组、多巴胺预处理组、多巴胺D1类受体拮抗剂组(D1拮抗剂组)、多巴胺D2类受体拮抗剂组(D2拮抗剂组),其中后两组分别为多巴胺D1类受体拮抗剂和D2类受体拮抗剂处理MPMs 30 min后再用多巴胺+LPS处理;(2)TLR4+/+和TLR4-/-MPMs.分为LPS组和多巴胺预处理组.LPS组用1μg/ml LPS刺激MPMs 6 h,多巴胺预处理组用10-4多巴胺作用MPMs2h后再用1μg/ml LPS刺激6h.Western blot检测各组细胞TLR4、白细胞介素-1β前体(pro-IL-1β)的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达.结果 (1)TLR4+/+ MPMsTLR4、pro-IL-1β和TNF-α的表达情况:对照组为0.56 ±0.07、0.65±0.11和(1 770.6±448.8) pg/ml,LPS组为1.12 ±0.15、1.24±0.20和(15 569.5±822.7) pg/ml,多巴胺预处理组为0.28±0.11、0.22±0.08和(7 800.7±862.6) pg/ml,D1拮抗剂组为0.25 ±0.12、0.18 ±0.09和(7 065.0±1 016.8)pg/ml,D2拮抗剂组为0.80±0.09、0.44±0.08和(14 299.6±1 430.9)pg/ml.其中LPS组均高于对照组和多巴胺预处理组(P均＜0.05),D2拮抗剂组均高于多巴胺预处理组(P＜0.05),而D1拮抗剂组与多巴胺预处理组差异无统计学意义(P＞0.05).(2) pro-IL-1β和TNF-α的表达情况:LPS组TLR4+/+MPMs为0.94 ±0.17和(15 109.0±1 903.4)pg/ml,TLR4-/-MPMs为0.08±0.04和(5 063.6±512.8)pg/ml;多巴胺预处理组TLR4+/+ MPMs为0.45 ±0.12和(6 383.9±1 287.3) pg/ml,TLR4-/-MPMs为0.05±0.02和(4 863.0±824.7) pg/ml.其中LPS组TLR4+/+MPMs的两指标均高于TLR4-/-MPMs(P均＜0.05).TLR4+/+MPMs多巴胺预处理组两指标均低于TLR4+/+ MPMs的LPS组(P＜0.05),TLR4-/-MPMs多巴胺预处理组两指标与TLR4-/-MPMs LPS组差异无统计学意义. 结论 多巴胺能够抑制LPS诱导的MPMs炎症反应,与多巴胺D2类受体和TLR4密切相关.