MG-132激活SHG-44细胞株自噬途径的体外实验

目的 探讨抑制蛋白酶体功能对人胶质瘤SHG-44细胞内自噬途径的激活作用.方法 采用5.0μmol/L蛋白酶体特异性抑制剂MG-132抑制人胶质瘤细胞SHG-44蛋白酶体功能.采用HE染色光镜观察细胞形态变化,AO染色荧光显微镜观察胞质内酸性囊泡细胞器的形成,锇铀铅染色透射电镜观察亚细胞结构变化.差速离心及蛋白印迹分析自噬关联蛋白Beclin及LC3的表达.结果 蛋白酶体功能被抑制后,HE染色光镜下可见SHG-44细胞的胞核呈深蓝色,大小无明显变化,部分染色质轻度浓缩,胞质内可见空泡,胞核附近胞质呈嗜酸性红染;荧光显微镜下见胞核呈黄绿色荧光,细胞核周围的胞质呈点状红色荧光;透射电镜下可见胞核无明显变化,胞质内出现自噬前体、自噬体及自噬溶酶体等亚细胞结构;蛋白印迹分析显示胞质内的Beclin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ显著增加.结论 抑制蛋白酶体功能可以有效地激活人胶质瘤SHG-44细胞内自噬途径.