H10N8禽流感病毒Real time RT-PCR检测方法的建立

目的 建立针对H10N8禽流感病毒特异、灵敏的real time RT-PCR检测方法.方法 通过比对现有H10N8病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)全长基因序列,分别针对HA和NA基因设计引物和探针6套(P1-P6)和3套(P7-P9),建立鉴别H10N8禽流感病毒real time RT-PCR方法,分别对筛选的引物进行特异性、灵敏性和临床标本检测适应性等评价.结果 特异性检测显示6套针对HA的引物和探针中的3套能够检测H10N8病毒,其中2套(P5和P6)与其他非H10亚型流感病毒无交叉反应;3套针对NA的引物和探针均能检测H10N8病毒,其中2套(P7和P9)与其他非N8亚型流感病毒无交叉反应.灵敏性检测显示,P5和P6以及P7和P9均能检出最大稀释度为109的H10N8病毒RNA,重复性显示4组的Ct值CV均＜3％.使用P6和P9对3例H10N8病例呼吸道标本份进行real time RT-PCR检测均为阳性,其中2例病毒分离阳性,4份病毒分离阳性的活禽相关环境样本检测均为阳性.结论 建立了H10N8禽流感病毒荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.