多西环素上调H929骨髓瘤细胞PI3K/Akt信号通路的作用不利于其抗骨髓瘤效应

目的:探索多西环素(DOX)上调骨髓瘤细胞株H929的p-Akt后对其杀伤骨髓瘤细胞效应的影响和可能的机制及其对Akt下游部分调控基因的影响.方法:不同浓度DOX处理骨髓瘤细胞株H929不同时间后,CCK-8检测其细胞增殖情况,Western blot法检测p-Akt、PTEN、p-PDK1、p-mTOR、p-GSK-3β、p-BAD等蛋白的表达水平,RT-PCR法检测Akt通路下游基因mTOR、BCL-2、NF-κB的相对表达量.选用PI3K抑制剂Wortmannin抑制p-Akt的上调后,CCK-8检测H929细胞增殖,Western blot法检测p-Akt蛋白表达水平.结果:不同浓度DOX处理H929细胞后,能在抑制细胞增殖的同时上调p-Akt的表达.在DOX处理H929细胞过程中及去除后,Akt上游的p-PDK1和PTEN水平均无明显变化.在DOX处理细胞后,Akt的下游调控蛋白p-mTOR蛋白水平无明显变化,而p-BAD和p-GSK-3β的表达均被上调;在mRNA水平上Akt的下游调控基因mTOR、BCL-2、NF-κB的表达均被下调.PI3K抑制剂Wortmannin能明显抑制DOX上调p-Akt的作用,并且增强DOX抑制H929细胞增殖的作用.结论:DOX处理H929细胞后可激活其PI3K/Akt信号通路,拮抗DOX的这一作用有助于增强其抑制骨髓瘤细胞的作用.