体外诱导骨髓细胞分化成巨核细胞的方法学研究

目的:探讨体外将小鼠骨髓细胞诱导分化为巨核细胞的方案,用于中药活性评价.方法:从小鼠股骨和胫骨取骨髓细胞,在血小板生成素(TPO)及TPO和干细胞因子(SCF)或TPO、SCF、白介素-6(IL-6)和白介素-9(IL-9)联合诱导下,体外培养6d.然后用倒置显微镜观察培养体系中的细胞生长情况,自动细胞计数仪检测细胞数量,流式细胞术分析培养体系中巨核细胞比例,并计算巨核细胞绝对数量.结果:单因子或多因子联合诱导方法均能体外促进骨髓细胞分化成巨核细胞,TPO轻微促进骨髓细胞分化成巨核细胞,TPO和SCF联合及TPO、SCF、IL-6和IL-9联合均显著促进骨髓细胞增殖和分化成巨核细胞,添加IL-6和IL-9可促进骨髓细胞分化成巨核细胞,减少非巨核细胞增殖.结论:TPO、SCF、IL-6和IL-9联合具有最强的促进骨髓细胞分化为巨核细胞的作用,可以用于促血小板形成中药活性筛选和评价.