布鲁氏菌104M液体气溶胶免疫BALB/c小鼠的有效性评价和安全性研究

目的:评价布鲁氏菌104M液体气溶胶肺递送途径免疫BALB/c小鼠有效性和安全性。方法:随机选取6～8周龄BALB/c雌鼠，分别经肺递送、滴鼻和皮下注射3种途径免疫接种布鲁氏菌104M，于免疫后第4、8、16、24周观察并记录小鼠的症状、检测小鼠体重、脾重、脾脏载菌量及肺匀浆、血清的抗体和细胞因子。待鼠脾脏载菌完全清除，用布鲁氏菌A19液体气溶胶肺递送途径攻毒。结果:各组实验小鼠均未见异常症状；体重无显著下降；攻毒前，脾重没有明显变化；攻毒后，免疫组小鼠脾重显著低于空白对照组（ P<0.05）：液体气溶胶肺递送：实验组（0.26±0.16）g<空白对照组（0.40±0.19）g，滴鼻：实验组（0.21±0.11）g<空白对照组（0.28±0.19）g，皮下注射：实验组（0.14±0.02）g<空白对照组（0.30±0.18）g。随着免疫时间的增长，免疫组小鼠脾脏载菌量呈下降趋势，第20周完全清除。攻毒后2周（免疫24周），所有小鼠脾脏载菌均显著增加，各免疫组脾载菌量均显著低于空白对照组（ P<0.05）：脾载菌量以log 10菌落形成单位（colony-forming units，CFU）/g计数并统计分析，液体气溶胶肺递送：实验组（4.49±0.13）<空白对照组（6.90±0.46）；滴鼻：实验组（3.59±1.06）<空白对照组（7.08±0.14）；皮下注射：实验组（3.00±2.03）<空白对照组（6.81±0.34）。布鲁氏菌104M激发了BALB/c小鼠细胞免疫和体液免疫反应。在免疫后第4周，检测到104M特异性抗体IgG、IgM、IgA，第8周达到高峰，攻毒后再次显著上升。各免疫组血清和肺匀浆中IFN-γ和IL-18浓度在攻毒前，均显著高于空白对照组（ P<0.05），攻毒后，各免疫组血清IFN-γ和IL-18浓度均低于空白对照组（ P<0.05），而肺匀浆细胞因子浓度在攻毒前后均持续高于空白对照组（ P<0.05）。 结论:液体气溶胶肺递送途径是一种有效的免疫途径，表现出有效的保护作用；104M未引起小鼠体重减轻，相对安全，但在小鼠体内存活时间较长，引起小鼠轻度脾脏肿大，有一定的残余毒力。