1,25(OH)2D3对脂肪干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响及作用机制

背景:脂肪间充质干细胞具有促进创伤修复的作用,但其分泌的Ⅰ型胶原会促进瘢痕形成,因此,寻找抑制脂肪间充质干细胞分泌胶原的方法将进一步增强其应用价值.目的:观察1,25(OH)2D3对脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响及其作用机制.方法:①利用胶原酶消化法分离培养人脂肪间充质干细胞,将第4代脂肪间充质干细胞分别培养在含不同浓度(10-7,10-8,10-9,10-10,0 mol/L)1,25(OH)2D3的DMEM/F12培养基中干预4 d,收集细胞培养上清,采用ELISA方法检测Ⅰ型胶原水平;②选取1,25(OH)2D3抑制Ⅰ型胶原分泌作用最明显的浓度对脂肪间充质干细胞进行干预,通过Real-time PCR检测1,25 (OH)2D3干预前后细胞内Smad3的mRNA表达,Western blot检测1,25(OH)2D3干预前后细胞内Smad3总蛋白和磷酸化蛋白表达;③在1,25(OH)2D3干预基础上加入SMAD3抑制剂SIS3对脂肪间充质干细胞进行干预,4 d后收集细胞培养上清,采用ELISA方法检测Ⅰ型胶原水平,以分析Smad3信号通路在其中的作用.结果与结论:①1,25(OH)2D3对人脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响表现为剂量依赖性抑制作用;②Real-time PCR和Western blot结果显示1,25(OH)2D3干预后Smad3表达水平有一定升高;Western blot结果显示磷酸化Smad3蛋白含量显著升高;③Smad3抑制剂可阻断1,25(OH)2D3对Ⅰ型胶原分泌的抑制作用;④这些结果表明,1,25(OH)2D3可能通过上调Smad3的表达及活性来抑制人脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原.