内质网应激通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导多形性胶质母细胞瘤干细胞凋亡的机制

[目的]探索内质网应激(ER stress)通过抑制H3K/AKT/mTOR信号通路诱导多形性胶质母细胞瘤肿瘤干细胞(GSC)凋亡的机制.[方法]临床获取多形性胶质母细胞瘤肿瘤组织标本,剪碎、胰酶消化、过滤、去除红细胞后,培养GSC;免疫荧光技术检测GSC抗原CD133、GFAP、Nestin、A2B5的表达;caspase3/7细胞凋亡检测试剂盒检测衣霉素(Tun)和毒胡萝卜素(Thap)对GSC的凋亡作用及MTS法检测细胞增殖活性;同时Western blot分析凋亡蛋白caspase3,ER stress标志蛋白C/EBP同源性蛋白(CHOP)及PI3K/AKT/mTOR信号通路标志蛋白AKT、mTOR表达水平;使用siRNA沉默CHOP基因后,检测上述蛋白表达水平变化.[结果]1周后肿瘤干细胞球形成,并可以表达CD133、GFAP、Nestin、A2B5等GSC抗原.ERstress激活后,可诱导GSC凋亡及降低细胞增殖活性,CHOP表达上调而p-mTOR、p-AKT(Ser473)、p-AKT(Thr308)表达下调;相反,沉默CHOP基因后,ER stress被抑制,上述效应减弱.[结论]ER stress可能通过负性调节PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导GSC凋亡.