不同储存时间的少白细胞单采血小板中外泌体释放及内容物

目的:探讨不同储存时间对少白细胞单采血小板(leukocyte-reduced apheresis platelet,LRA-Plt)中外泌体(exosome,EXO)释放及内容物的影响.方法:应用ExoQuick获得不同储存时间对LRA-Plt中的EXO,采用透射电镜术(transmission electron microscopy,TEM)、蛋白免疫印迹法、动态光散射(Dynamic Light Scattering,DLS)法分别进行形态、免疫标记、粒径分布检测.应用DLS检测不同储存时间LRA-Plt中EXO的粒径分布变化,通过Nanodrop(R) ND-2000检测不同储存时间LRA-Plt中EXO的蛋白和RNA含量变化.结果:成功获取类杯状、CD63/TSG101富集、Calnexin阴性、直径分布在30-200 nm的LRA-Plt来源EXO.储存早期(储存d1、2),LRA-Plt来源EXO的粒径较小,分布多在30--40 nm;蛋白和RNA含量较低;2组间粒径分布、蛋白和RNA含量无显著差异(P＞0.05).储存中晚期,LRA-Plt来源EXO的粒径较储存早期大,分布多在130-200 nm;蛋白和RNA含量较早期显著上升;与储存早期相比,储存中晚期LRA-Plt中EXO在粒径分布、蛋白和RNA含量上均出现显著上升(P＜0.05).结论:储存中晚期的LRA-Plt中EXO形态与储存早期存在差异,且粒径分布、蛋白和RNA含量显著高于储存早期.EXO携带的大量蛋白和RNA可能参与了血小板输注后多种功能作用的执行.