新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞纯化及培养方法的改进

目的 快速纯化大鼠大脑皮质原代星形胶质细胞并进行传代培养.方法 取新生2日龄SD大鼠大脑皮层,每2只为一组,将剥除软脑膜的大脑皮层剪碎,添加0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液500 μL,37℃消化15 min,将细胞悬液接种于未用多聚赖氨酸处理过的培养瓶中,37℃、5％ CO,细胞培养箱中孵育15 min后,将细胞以5×106个/mL接种于L-多聚赖氨酸包被的T75培养瓶中.待细胞长满瓶底,200 r/min 37℃恒温摇18h,加入1 mL 0.25％胰蛋白酶,待大部分细胞悬浮后收集细胞.在倒置相差显微镜下对细胞进行形态学观察,胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色法进行星形胶质细胞纯度鉴定,并以MTS法测定传代后细胞增殖活力.结果 星形胶质细胞纯度达到(97.86±0.91)％,细胞传代后生长情况及增殖活力良好.结论 该方法可以高效获取原代及传代的大鼠大脑皮质星形胶质细胞.