表面展示新城疫病毒部分F蛋白的重组干酪乳杆菌的构建及其免疫原性

本研究旨在构建重组干酪乳杆菌pLA-Newcastle disease virus (NDV)-F/Lactobacillus casei,获得表达产物,并探讨其免疫效果.利用PCR扩增携带部分主要抗原表位的NDV F基因,与穿梭质粒pLA连接转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,筛选阳性重组质粒,将其电转化至干酪乳杆菌中,构建重组干酪乳杆菌pLA-NDV-F/L.casei,应用PCR鉴定阳性菌株,Western blotting鉴定重组菌反应原性,间接免疫荧光、流式细胞术和激光共聚焦检测蛋白表达情况.试验选用14日龄雏鸡,各组免疫方式为口服+滴鼻.设立pLA-NDV-F/L.casei两次免疫组和三次免疫组、弱毒疫苗组、pLA/L.casei、未攻毒PBS组和攻毒PBS组.间接ELISA方法检测雏鸡血清IgG、肠道、鼻腔、肺脏中sIgA抗体效价,评价试验组雏鸡攻毒保护率.结果 表明,有94.10％的重组菌表达了F蛋白,且高效表达在干酪乳杆菌细胞表面,蛋白大小为62 kDa,并能与抗NDV阳性血清特异性结合.各免疫组anti-F IgG和sIgA抗体水平显著高于对照组,pLA-NDV-F/L.casei三次免疫组抗体持续时间比两次免疫组延长28d,抗体峰值没有显著差异.免疫pLA-NDV-F/L.casei三次、两次、弱毒疫苗、pLA/L.casei和PBS的攻击保护率分别为80％、80％、90％、0％和0％.因此,利用干酪乳杆菌表达体系成功表达了携带部分抗原表位的NDV F基因,具备良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫应答.