骨膜蛋白通过let-7／miR?98家族的调控影响结肠癌细胞的凋亡和上皮?间质转化

目的 观察骨膜蛋白(Postn)在结肠癌组织和细胞中的表达,探讨抑制或过表达Postn在结肠癌细胞中的生物学作用及其作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应( RT?qPCR)和Western blot分别检测20例结肠癌组织及其癌旁组织、结肠癌细胞系SW480、HT?29、HCT?116及人正常结肠上皮细胞 NCM460 中 Postn、 let?7a 和 miR?98 的表达.将 Postn 的小干扰 RNA ( siRNA)、pcDNA3.1?Postn质粒、let?7a 模拟物(mimic)及其阴性对照let?7a mimic?NC、miR?98 mimic及其阴性对照miR?98 mimic?NC转染HCT?116细胞. 3?(4,5?二甲基噻唑?2)?2,5?二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因检测微小RNA(miRNA)和Postn的靶向关系.结果 结肠癌组织中Postn的表达比癌旁正常组织显著上调(P＜0.05),let?7a和miR?98表达均下调(均P＜0.05).结肠癌细胞系SW480、HT?29和HCT?116中Postn的表达比人正常结肠上皮细胞NCM460均显著上调(均P＜0.05),let?7a和miR?98表达均下调(均P＜0.05).在结肠癌组织中,Postn的表达与let?7a和miR?98的表达均呈负相关( r＝－0.69,P＜0.001;r＝－0.80,P＜0.001).体外抑制Postn表达能够降低HCT?116细胞的存活率[( 53.73± 7.63)%,P＜0.05],提高细胞凋亡率[(22.88± 3.40)%,P＜0.05],上调上皮?间质转化(EMT)相关蛋白E?cadherin的表达(2.44±0.39,P＜0.05),而下调N?cadherin和Vimentin的表达(0.44±0.07和0.38±0.06,均P＜0.05);体外过表达Postn则能够增强HCT?116细胞的存活率[(134.41±8.82)%,P＜0.05],下调E?cadherin的表达(0.55±0.09,P＜0.05),而上调N?cadherin和Vimentin的表达(2.93±0.42和2.24±0.34,均P＜0.05),但对细胞凋亡率无影响(P＞0.05). Postn是let?7a和miR?98的一个靶基因,let?7a或miR?98过表达能够部分逆转Postn过表达在结肠癌细胞中的生物学作用.结论 Postn是结肠癌的促癌分子,抑制Postn表达能够提高结肠癌细胞的凋亡率并降低EMT水平,且Postn的表达和功能与let?7a和miR?98的调控有关.