单核苷酸错配对于Cpf1特异性的影响

CRISPR/Cas系统从发现和应用以来,热度持续上升.在过去几年中,这种技术已经成为了基因编辑的标准方案.该技术用一条指导RNA(guide RNA)来引导Cas9或Cpf1等核酸酶在特定的位点实现双链打断.但是这种系统也有可能在非特异性的位置进行切割,这种现象成为“脱靶效应”.脱靶剪切现象可能会给基因功能研究或者临床治疗带来很多麻烦.为了深入研究Cpf1的特异性,本研究通过一套双荧光报告系统探索了单核苷酸错配的影响.结果 表明,间隔区内的poly(T)结构会阻止Cpf1的靶向切割.而且rA的错配似乎是CRISPR/Cpf1容忍度最低的一类,这与CRISPR/Cas9的情况相同.这种相似性可能来源于两种酶在进化上的同源性.上述结果表明,在使用CRISPR/Cp1或者CRISPR/Cas9的时候应当更多注意其脱靶效应,因为这种效应是这套系统的一个内在特性.