人巨细胞病毒IE1真核表达载体的构建与表达

目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)IE1真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达,为HCMV IE1核酸疫苗的相关研究奠定基础.方法 将质粒pNEB193-IE1用SalⅠ、BamHⅠ双酶切与载体pEGFP-C1连接构建重组载体pEGFP-C1-IE1;双酶切鉴定后,取重组载体pEGFP-C1-IE1用 EcoRⅠ、HindⅢ双酶切与载体pcDNA3.1(-)连接构建重组质粒pcDNA3.1(-)-IE1,双酶切和测序鉴定;将重组质粒pcDNA3.1(-) -IE1转染HeLa细胞,RT-PCR检测IE1 mRNA的表达.结果 重组载体pEGFP-C1-IE1和 pcDNA3.1(-)-IE1双酶切后均可切出约1 476 bp目的 片段;重组载体pcDNA3.1(-)-IE1测序结果登录GenBank,作BLAST分析,含有1 476 bp目的 基因片段,无碱基错配和移码突变,与读码框完全一致;转染重组载体pcDNA3.1(-)-IE1的细胞中可扩增出约1 476 bp的目的 条带.结论 成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-IE1,且其能在真核细胞内表达.