抗树鼩CD3ε单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

目的:制备鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.方法: 以GST-CD3ε蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 方法检测,筛选出多株能分泌抗树鼩CD3ε的杂交瘤细胞株,经过3次亚克隆筛选后,制备小鼠腹水单克隆抗体,并纯化得到鼠抗树鼩CD3ε单克隆抗体,通过腹水单克隆抗体效价测定、单克隆抗体亲和力测定、单克隆抗体抗原表位分析、Western blot和流式细胞荧光分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)分析其生物学特性.结果: 筛选到5株能稳定分泌抗树鼩CD3ε单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为78I、87I、92D1、75II和35C8,腹水单克隆抗体效价分别为1∶106、1∶106、1∶104、1∶106、1∶103,亲和力解离常数(Kd)分别为1.8×10-5、2.9×10-5、4.9×10-5、7.3×10-5、3.6× 10-5.5株单克隆抗体抗原表位分析显示78I、87I和75II识别同一抗原表位,而92D1和35C8识别另一抗原表位.经Western blot检测,HRP标记后的92D1能识别GST-CD3ε蛋白和树鼩外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC) ,并对大鼠、小鼠和猴的PBMC有抗体交叉反应.经FACS检测,PE-Cy5.5标记后的92D1能特异性识别树鼩PBMC.结论: 成功制备出鼠抗树鼩CD3ε的单克隆抗体,为进一步应用于树鼩免疫检测奠定基础.