İnsan İnsülin Hormonu Öncülerinin Pichia pastoris AOX1 Promotoru Altında Klonlanması, Ekspresyonu ve Biyoreaktörde Üretimi

İnsülin pankreasın beta hücrelerinden üretilen ve vücutta glukoz dengesini sağlayan önemli bir peptit hormondur. Pankreasın yeterli miktarda insülin üretememesi ya da hücrelerin üretilen insüline cevap verememesi sonucu kan glukoz düzeyinin yükselmesiyle diyabet adı verilen metabolik bir hastalık meydana gelir. Günümüzde bu hastalığın tedavisinde insülin hormonu kullanılmaktadır. İnsülin hormonu genetik mühendisliği teknikleri kullanılarak rekombinant olarak üretilen ilk proteindir. İlk olarak Escherichia coli ve Saccharomyces cerevisiae’da üretilmeye başlanmış, ancak son zamanlarda rekombinant insülin üretiminde Pichia pastoris (Komagataella phaffi) ’in kullanımı yaygınlaşmıştır. Bu çalışmada, insan insülin hormonu öncülerinin (IP) P. pastoris’in metanol ile indüklenebilir AOX1 promotoru altında üretimini sağlamak amacıyla; bu proteini kodlayan DNA fragmenti transformasyon ve ligasyon gibi moleküler biyoloji teknikleri kullanılarak plazmide aktarılarak istenen proteini kodlayan bir ekspresyon vektörü elde edilmiştir. Ekspresyon vektörünün lityum asetat yöntemiyle yetenekli hale getirilen P. pastoris X33 suşuna elektroporasyonla transferi sağlanmıştır. 5L ölçekli biyoreaktörde yapılan protein ekspresyonu çalışması sonrasında alınan örnekler SDS-PAGE ve ELISA yöntemleriyle analiz edilmiş ve 7.5 mg/L IP proteini üretildiği tespit edilmiştir.