Images et comptes cellulaires de cochlées intactes et transparentes de gerbille de Mongolie par microscopie confocale à balayage laser

Resume Objectifs Realiser le protocole de clarification sur des cochlees de gerbilles de Mongolie et evaluer la possibilite de quantifier et d’analyser la cytoarchitecture tri-dimensionelle (3D) de ces cochlees transparisees. Materiels et methodes Les oreilles internes fraichement dissequees etaient preparees suivant un protocole de 13 jours : fixation, microdissection, post-fixation, decalcification, pre-traitement (amplification du signal, permeabilisation et blocage), marquage fluorescent (immunomarquage indirect et marquage direct), deshydratation, transparisation en solution de Spalteholz (methyl salicylate et benzoate de benzyl [MSBB]) et montage. L’acquisition des images etait realisee par microscopie confocale a balayage laser. Le logiciel ImageJ etait utilise pour mesurer la longueur analysee de l’organe de Corti analysee et compter les cellules ciliees internes et externes. Resultats Quatre cochlees ont ete imagees. Les reconstructions 3D permettaient l’analyse de grandes longueurs d’organes de Corti. La longueur moyenne d’organe de Corti analysee etait de 1269 (± 346) μm. Le nombre moyen de cellules ciliees par longueur d’organe de Corti etait : 142 (± 44) cellules ciliees internes et 400 (± 122) cellules ciliees externes. Conclusion La transparisation cochleaire par le MSBB peut etre realisee chez la gerbille de Mongolie, permettant d’obtenir des images en haute resolution d’oreilles internes marquees en immunofluorescence. Ceci constitue, a notre connaissance, la premiere application de cette technique dans cette espece. Elle permet ainsi des comptes cellulaires, sans dissection traumatique, sur de grandes longueurs d’organe de Corti.