β-catenin协同BMP9诱导骨肉瘤TE85细胞成骨分化

目的:检测β-连环蛋白(β-catenin)联合骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)对骨肉瘤TE85细胞成骨分化的影响.方法:采用构建有β-catenin和BMP9基因的重组腺病毒Adβ-catenin和AdBMP9,单独或联合感染人骨肉瘤TE85细胞,并用半定量RT-PCR法检测β-ca555tenin和BMP9 mRNA在TE85细胞中表达水平的改变;荧光素酶报告基因系统检测β-catenin/TCF4相对活性的变化,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和读数法分析TE85细胞的早期成骨能力,茜素红染色法检测细胞的晚期成骨能力;半定量RT-PCR法检测骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)以及晚期成骨分化指标骨钙蛋白(osteocalcin,OC)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN) mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测OC和OPN蛋白的表达水平.结果:重组腺病毒Adβ-catenin与AdBMP9感染TE85细胞后能显著提高外源性β-catenin与BMP9 mRNA的表达水平(P值均＜0.05),Adβ-catenin能明显增强β-catenin/TCF4的相对活性(P＜0.05).Adβ-catenin 与AdBMP9能分别诱导骨肉瘤细胞TE85早期成骨分化指标ALP活性增加(P＜0.05),但增加的程度有限;对晚期成骨指标OC和OPN mRNA和蛋白表达以及钙盐沉积无明显上调的作用.Adβ-catenin与AdBMP9联合作用之后,上述各项早晚期成骨指标的表达均显著增强,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论:β-catenin和BMP9单独诱导骨肉瘤细胞TE85成骨分化的能力有限,而联合作用后诱导成骨分化的能力显著增强,β-catenin能协同BMP9诱导骨肉瘤细胞TE85成骨分化.