Eine durch Lipid-Wasser-Trennung verstärkte FRET-Sonde zur Detektion der Sauren Sphingomyelinase in lebenden Zellen

Eine Echtzeit-Beobachtung der Aktivitat der Sauren Sphingomyelinase (ASM) ist notwendig zur Aufklarung ihrer Rolle in Lipid-Signaltransduktionsprozessen. Mithilfe von Phosphorodichloridat-Chemie gelang die Synthese von fluoreszierenden Phosphosphingolipiden mit der Fahigkeit zum FRET. Diese Sphingomyelin-Analoga sind Substrate fur die rekombinante humane ASM und ermoglichen die Verfolgung der ASM-Aktivitat mittels Fluoreszenzspektroskopie. Inkubation mit Zell-Lysaten von Wildtyp- und Knockout-Mausen zeigte eine ausschliesliche Spaltung durch ASM. Daruber hinaus nutzten wir systematisch die Umgebungsempfindlichkeit der Fluorophore, um signifikante Zuwachse in der Responsivitat zu erzielen. Die dabei angewendeten Konzepte konnten auch fur andere zukunftige Lipase-Sonden zum Einsatz kommen. Eine mikroskopische Abbildung der ASM-Aktivitat in lebenden Zellen wurde mittels Zweiphotonenanregung realisiert.